Các loại cột HPLC khác nhau được sử dụng trong phân tích
Hướng dẫn sử dụng Các loại cột HPLC khác nhau trong phân tích
Nói chung, silica gel được lấp đầy trong các cột sắc ký lỏng hiệu năng cao vì kích thước hạt và độ xốp của nó giúp tách các thành phần và silica gel cũng là một vật liệu trơ không phản ứng với các pha di động. Do đó, cột silica có thể được sử dụng để phân tích các hợp chất của các bản chất hóa học khác nhau. Vật liệu được điền vào các cột HPLC được gọi là pha tĩnh.
1) Cột pha thông thường
2) Cột pha đảo
3) Cột trao đổi ion
4) Cột loại trừ kích thước1) Cột HPLC pha thông thường:
Loại cột này có nhiều pha tĩnh hơn so với pha động. Vật liệu đóng gói của cột phải có cực hơn pha động và điều kiện này được đáp ứng bởi silica là vật liệu phân cực. Nhưng nước có cực hơn so với silica, do đó, nước không được sử dụng và methylene clorua, hexane và chloroform hoặc hỗn hợp của chúng với dietyl ete được sử dụng làm pha động.Việc tách các thành phần mẫu xảy ra trên cơ sở độ phân cực của các thành phần mẫu. Các thành phần mẫu có nhiều cực tương tác nhiều hơn với pha tĩnh phân cực dẫn đến tách khỏi thành phần ít phân cực tương tác với pha động ít phân cực hơn. Cột silica được sử dụng rộng rãi trong phân tích dược phẩm. Việc đóng gói cột sắc ký trong đó các cột pha thông thường được sử dụng được gọi là sắc ký pha thông thường.2) Cột HPLC pha đảo ngược:
Trong các cột pha đảo như tên của nó, nó ngược lại với các cột pha thông thường. Nó có pha tĩnh không phân cực hoặc ít cực hơn pha động cực hơn. Các hydrocacbon ngoại quan như C8 và C18 và các hydrocacbon không phân cực khác được sử dụng làm pha tĩnh trong các cột pha đảo ngược trong khi dung dịch hữu cơ dạng nước như hỗn hợp nước-metanol hoặc nước-axetonitril được sử dụng làm pha động.
Việc tách các thành phần mẫu trong các cột pha đảo ngược cũng xảy ra trên cơ sở phân cực của các thành phần mẫu nhưng nó xảy ra ngược lại với các cột HPLC pha thông thường, do đó, loại sắc ký này được gọi là sắc ký ngược pha.
3) Cột HPLC trao đổi ion:
Các hợp chất có thể dễ dàng ion hóa được phân tích bằng các cột này. Pha tĩnh trong các cột này vẫn có tính axit hoặc bazơ có điện tích âm hoặc dương trong khi pha động là chất lỏng phân cực như dung dịch muối trong nước. Sự phân tách các phân tử xảy ra trên cơ sở lực ion hấp dẫn giữa các phân tử và pha đứng yên. Do sự trao đổi các ion trong quá trình tách các thành phần mẫu, nó được gọi là sắc ký trao đổi ion.
4) Cột HPLC loại trừ kích thước:
Pha tĩnh của các cột trong các cột này cho phép tách các thành phần theo kích thước của chúng. Sự kết hợp của các polyme như polysacarit và silica được sử dụng làm pha tĩnh trong các cột này. Các phân tử mẫu nhỏ thâm nhập vào lỗ chân lông của pha tĩnh trong khi các phân tử lớn xâm nhập một phần vào lỗ chân lông. Do đó, các phân tử lớn của mẫu rửa giải trước hơn các phân tử nhỏ và sắc ký này được gọi là Sắc ký loại trừ kích thước. Những cột này thường không được sử dụng trong phân tích các hợp chất dược phẩm.
Các cột HPLC có chiều dài khác nhau thay đổi từ 30 mm đến 250 mm và kích thước hạt hoặc độ xốp của chúng từ 3 sóng đến 5 sóng. Các yếu tố này ảnh hưởng đến việc phân tích mẫu, do đó, những yếu tố này được coi là quan trọng trong quá trình phát triển phương pháp phân tích HPLC. Các cột được chọn theo tính chất của hợp chất cần phân tích và pha động. Hiệu suất cột cũng nên được đánh giá theo thời gian nói chung sau 1000 lần chạy hoặc theo yêu cầu
Khối lượng trễ trong HPLC là gì?
